Les milieux de culture

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Composition des milieux en bactériologie et mycologie

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Recherche   alphabétique (banque de données réalisé par M.JN. JOFFIN)

A B C D E F G H I J K L M N O
P Q R S T U V W X Y Z

A

ADH
Mannitol_hypersalé-lécithine_(Chapman_lécithine)
ADN_(gélose_à_l')
ADN-Bleu_de_toluidine_(milieu_pour_le_thermonucléase)
Auxanogramme_du_carbone_(milieu)
 

B

Baird_Parker_(gélose)
BCP_(bouillon_lactosé_au_BCP)
BCP_(gélose_lactosée_au_bromocrésol_pourpre)
BCYE_(gélose_pour_Legionella)
BEA_(gélose_Bile_Esculine_Azide)
BGT_(bouillon_glucosé_tamponné)
Blastèse_(milieu)
BMPA_alpha_(gélose_pour_Legionella)
Bordetella_pertussis_(gélose)_oxoid
Bilié_(bouillon)
Frazer_(bouillon_de)
Bryant_et_Burkey_(bouillon)

 
 
 
 
 

C

Cétrimide_(Gélose_au)
Chapman_(Gélose_de)
Chocolat_enrichie_+_bacitracine_(Gélose)
Chocolat_enrichie_+_VCN_(ou_VCF)_(Gélose)
Chocolat_supplémentée_(Gélose)
Chocolat_non_supplémentée_(Gélose)
Citrate_de_Christensen
Citrate_de_Simmons
Clark_et_Lubs_(Bouillon)
CLED_(Gélose)
Coeur-Cervelle
Coletsos
Coletsos
Columbia_(Gélose)
Columbia_au_sang_+_ANC
Columbia_au_sang
Conservation_(gélose_pour)
CTA_(milieu)
 

D

DCL_(gélose)_(Désoxycholate-Citrate-Lactose)_(milieu_de_Hynes)
Dénombrement_(Gélose_pour)_(PCA)
Dénombrement_des_Coliformes_0,1_%
Désoxycholate-Citrate-Lactose-Saccharose
Drigalski_(gélose)
Dubos_(bouillon_de)
 

E

Eau_peptonée
EMB_(gélose)_(milieu_de_Lévine)
EMB_saccharosé_(gélose)_(milieu_de_Teague)
ENDO_(milieu)
Esculine_(gélose)
Extrait_de_malt_(gélose_à_l')
 
F    
G Gélatine_nutritive
Nutritive_(gélose)
Glucosé_tamponné_(bouillon)
GVPC_(gélose_pour_Legionella)
 
H Hektoen_(gélose)
Hoyle_(milieu)
Hugh_et_Leifson
Hypertonique_(bouillon)_(hypersalé)
 

I

   

j

   

k

King_A
King_B
Kristensen_(gélose_lactosée_au_vert_brillant_et_au_rouge_de_phénol)
 

L

Lactosé_au_BCP_+_cloche
Lactosé_bilié_au_vert_brillant_+_cloche_(BLBVB)
Lactose-Glucose-H2S_(Kligler-Hajna)
Lactosée_au_Tergitol_7_et_au_TTC_(Gélose)
LDC
Litsky_(milieu_de)
Lowenstein-Jensen
Lysine_Fer
 

M

M17_(gélose)
Mac_Conkey_n°2_(Gélose)
Mac_Conkey_n°3_(Gélose)
Mannitol-Mobilité-Nitrate
Mossel_(Gélose)_pour_Bacillus_cereus
Mox_(Gélose_OXFORD_modifiée_au_moxalactam)
MRS_(Gélose_de_Man,_Rogosa,_Sharpe)
Mueller-Hinton_(Gélose)
Muller-Kauffmann_(bouillon_de_base_au_tétrathionate)
 

N

Nitraté_(bouillon)
Nitrité_(bouillon)
 
O ODC
Oxford_Curtis_(Gélose)
 

P

PALCAM_(gélose)
PCA_standard_ou_gélose_pour_dénombrement
PCB_(gélose)
Phényl-alanine_(gélose)
 

Q

   

R

Rappaport_Vassiliadis_(bouillon)
RAT
Rosenow
Rothe_(milieu_de)
 

S

Sabouraud_(Gélose)
Sabouraud_à_
l'actidione_(Gélose)
Sabouraud_à_la_
gentamycine_(Gélose)
Sabouraud_au_
Chloramphénicol_et_à_l'actidione
Sabouraud_au_C
hloramphénicol
Sabouraud-
Tétrazolium_au_chloramphénicol_(Gélose)
Salmonella-
Shigella_(Gélose_SS)
Schaedler_(Bouillon_de)
Schaedler_(Gélose_de)
Sélénite_(bouillon)
Sérum_de_Boeuf_coagulé_(SBC)
Slanetz_(gélose_de)
 

T

TCBS
TGY_et_TY
Tinsdale_(Gélose)
Todd-Hewitt_(bouillon)
Trypticase-Soja_(gélose)
TSC_(Tryptone_Sulfite_Cyclosérine)
TSI
TSN_(Tryptone_Sulfite_Néomycine)
 

U

Urée_de_Christensen
Urée-tryptophane_(Urée_Indole)
 

V

Vert_brillant_et_Rouge_de_Phénol_(Gélose)
VF_(gélose)
VF_nitratée_(gélose)
Viande_Levure_(VL)
VRBG
VRBL
 

W

 

 

X

XLD_(Gélose)

 

Y

Yersinia_CIN_(gélose_de_Schiemann)

 

Z

 

 


ADH

Usage : recherche de l'ADH

Composition :

	extrait de levure	3,0 g
	L-arginine (monochlorhydrate)	5,0 g
	glucose	1,0 g
	bromocrésol pourpre	0,16 mg
	éthanol	1 ml
	chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

Le milieu est acheté prêt à l'emploi ou fabriqué à partir des différents constituants. Il est indispensable de contrôler le pH. Pour utiliser la forme DL de l'acide aminé il est indispensable de doubler la dose. Autoclavage classique.

Lecture :

L'alcalinisation avec culture montre la présence d'une ADH. (violet)Un milieu acide montre la fermentation du glucose et l'absence de l'ADH.Une absence de culture est possible pour une bactérie aérobie stricte ou très exigeante.

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Mannitol_hypersalé-lécithine_(Chapman_lécithine)

Usage : isolement des Staphylocoques (moins sélectif qu'en Chapman)

Composition :

	peptone	16 g
	lécithine	1 g
	(lécithine)	
	mannitol	10 g
	chlorure de sodium	75 g
	rouge de phénol	25 mg
	agar	12 g

Préparation :

Ce milieu Korano est préparé dans le four à micro-ondes de façon habituelle. La lécithine est incluse dans la poudre.

Lecture :

Le milieu est légèrement opalescent à cause de la lécithine.Les colonies mannitol + sont jaunes, les mannitol - rouges.Korano n'indique pas si la lécithinase est lisible ce qui laisse supposer que non

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ADN_(gélose_à_l')

Usage : recherche de la DNase

Composition :

	Hydrolysat trypsique de caséine	20,0 g
	ADN	2,0 g
	Chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	12,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

39 g par litre.Autoclavage classique.

Lecture :

La gélose est ensemencée par strie.Pour la lecture : recouvrir d'HCl ou de bleu de toluidine.Un précipité autour de la strie ou une coloration bleue montre l'absence de DNAse.L'absence de précipité ou une coloration rose signe la présence d'une DNAse.

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ADN-Bleu_de_toluidine_(milieu_pour_le_thermonucléase)

Usage : recherche de la DNAse thermorésistante de Staphylococcus (Microbiologie alimentaire et médicale)

Composition :

	ADN	0,3 g
	Bleu de toluidine à 0,1 mol dm-3	3,0 ml
	Tampon TRIS pH 9 50 mmol dm-3	1,0 dm3
	Chlorure de calcium 10 mmol dm-3	1,0 ml
	Chlorure de sodium	10,0 g
	Agar	10,0 g
	pH = 9	

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi.Il est possible de la fabriquer à partir des constituants de base.

Lecture :

Percer la gélose de trous. Inoculer avec quelques gouttes d'un bouillon coeur cervelle ensemencé auparavant et bouilli 10 minutes.Incuber 4 heures à 37°C.Observer un éventuel halo rose signant la DNase autour des trous percés sur le fond bleu de la gélose.

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Auxanogramme_du_carbone_(milieu)

Usage : auxanogramme du carbone, composition pour champignons applicable aux bactéries probablement avec un pH ajusté à 7.

Composition :

	L-histidine	10,0 µg
	D-méthionine	20,0 µg
	D-tryptophane	20,0 µg
	biotine	10,0 ng
	Thiamine	1,0 µg
	Pyridoxine	1,0 µg
	pantothénate de calcium	1,0 µg
	acide nicotinique	1,0 µg
	inositol	10,0 µg
	sulfate d'ammonium	5,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	sulfate de magnésium	0,5 g
	chlorure de calcium	0,1 g
	chlorure de sodium	0,1 g
	solution d'oligoéléments (Berthelot)	0,5 ml
	agar	18,0 g
	pH = 5,6	

Préparation :

Le milieu est généralement vendu prêt à l'emploi.Il est utilisé après fusion en boîte sur laquelle sont placés des disques imprégnés de la source de carbone à tester.

Lecture :

Conditionné en boîte, les disques de glucides (ou d'autres sources de carbone) seront placés en surface suffisamment écartés. Des disques de diamètre trop importants peuvent rendre la lecture difficile.En tube (ou en microtubes dans une microplaque) la source de carbone sera ajoutée dans le milieu en surfusion.

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Baird_Parker_(gélose)

Usage : numération des Staphylococcus aureus en microbiologie alimentaire. Isolement des Staphylococcus aureus.

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande de boeuf	4,0 g
	extrait de levure	2,0 g
	pyruvate de sodium	10,0 g
	glycocolle	12,0 g
	émulsion de jaune d'oeuf	50,0 cm3
	Tellurite de potassium	0,1 g
	Chlorure de lithium	5,0 g
	Agar	20,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

63 g par litre.Le milieu de base est autoclavé. Tellurite et jaune d'oeuf sont ajoutés ensuite à raison de 1 cm3 pour 20 cm3 de milieu de base. (IPP)De la sulfaméthazine peut être ajoutée pour inhiber Proteus.

Lecture :

Trois caractères sont lus : - la présence d'une lipoprotéinase par un halo transparent autour des colonies - la présence d'une lécithinase par un halo trouble autour des colonies - la réduction du tellurite en tellure noir par la couleur de la colonieS. aureus est lipoprotéinase + (en général), lécithinase + et réduit le tellurite en tellure. (colonies noires de 1 à 2 mm de diamètre).

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BCP_(bouillon_lactosé_au_BCP)

Usage : Dénombrement des coliformes des eaux.

Composition :

	Peptone	5,0 g
	Extrait de viande	2,0 g
	Lactose	5,0 g
	Bromocrésol pourpre 	25 mg
	 pH = 6,9	

Préparation :

12 g par litre.Autoclavage classique. Ne pas oublier d'ajouter une cloche dans le tube.

Lecture :

Coloration jaune : lactose +Coloration violette : lactose -Ce miliue peut être utilisé pour le dénombrement des coliformes dans les eaux. Toutefois on préférera la technique par filtration.

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BCP_(gélose_lactosée_au_bromocrésol_pourpre)

Usage : isolement non sélectif en particulier pour les Entérobactéries

Composition :

	Peptone	5,0 g
	Extrait de viande	3,0 g
	Lactose	10,0 g
	Bromocrésol pourpre  	0,025 g
	Agar	11,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

30 g par litre.Autoclavage classique

Lecture :

Toutes les bactéries de culture facile cultivent sur ce milieu.Les colonies lac + sont jaunes, les colonies lac - restent violettes.

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BCYE_(gélose_pour_Legionella)

Usage : isolement de Legionella

Composition :

	extrait de levure	10,0 g
	L-Cystéine chlorhydrate	0,4 g
	alpha-cétoglutarate	1,0 g
	pyrophosphate de fer III	0,25 g
	tampon ACES/ hydroxyde	10 g
	charbon activé	2,0 g
	agar	13,0 g

Préparation :

À la gélose de base CYE sont ajoutés le suppléments de croissance thermosensible.

Lecture :

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BEA_(gélose_Bile_Esculine_Azide)

Usage : Isolement sélectif des Enterococcus

Composition :

	Peptone	17,0 g
	Peptone pepsique de viande	3,0 g
	Extrait de levure	5,0 g
	Esculine	1,0 g
	Citrate de sodium	1,0 g
	Citrate de fer ammoniacal	0,5 g
	Bile de boeuf déshydratée	10,0 g
	Azide de sodium	0,25 g
	Chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	13,0 g
	pH = 7,1	

Préparation :

45 g par litre.Autoclavage classique

Lecture :

Des colonies noires montrent l'hydrolyse de l'esculine révélée par les ions de fer III.(une confusion est possible avec H2S mais les bactéries cultivant sur ce milieu sont habituellement H2S -)Certains fabricants proposent un milieu analogue sans azide. (gélose Bile-Esculine).

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BGT_(bouillon_glucosé_tamponné)

Usage : bouillon riche en particulier pour les Streptococcus

Composition :

	peptone	20,0 g
	extrait de viande	2,0 g
	glucose	4,0 g
	chlorure de sodium	2,5 g
	dihydrogénophosphate de potassium	0,7 g
	hydrogénophosphate de sodium	8,3 g
	pH = 7,4	

Préparation :

37,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :


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Blastèse_(milieu)

Usage : milieu utilisé pour la production de "tubes germinatifs" par Candida albicans.

Composition :

	milieu prêt à l'emploi (Institut Pasteur production) dont la composition n'est pas révélée 	

Préparation :

milieu prêt à l'emploi.

Lecture :

Ensemencer en surface pour obtenir un léger trouble. Observer au microscope après 3 heures à 37°C.

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BMPA_alpha_(gélose_pour_Legionella)

Usage : isolement sélectif de Legionella

Composition :

	extrait de levure	10,0 g
	L-Cystéine chlorhydrate	0,4 g
	alpha-cétoglutarate	1,0 g
	céfamandole	4 mg
	polymyxine B	80 kUI
	anisomycine	80 mg
	pyrophosphate de fer III	0,25 g
	tampon ACES/ hydroxyde	10 g
	charbon activé	2,0 g
	agar	13,0 g
	pH = 6,9	

Préparation :

à la gélose de base CYE sont ajoutés les suppléments de croissance et inhibiteurs thermosensibles.

Lecture :


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Bordetella_pertussis_(gélose)_oxoid

Usage : isolement sélectif de Bordetella pertussis

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	10,0 g
	sang	100 ml
	acide nicotinique	1 mg
	amidon	10,0 g
	cefalexine	40 mg
	charbon	4,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	12,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

25,5 g par litre. Autoclavage classique.La cefalexine est ajoutée extemporanément.

Lecture :


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Bilié_(bouillon)

Usage : identification des Enterococcus

Composition :

	extrait de viande	4,0 g
	peptone	10,0 g
	bile déshydratée	40,0 g
	Chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi.

Lecture :

La présence d'une culture traduit la capacité des bactéries du milieu de cultiver en présence de bile.(On peut utiliser la gélose BEA pour le même test)

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Frazer_(bouillon_de)

Usage : Enrichissement en Listeria

Composition :

	polypeptone		10,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	extrait de viande	 	5,0 g
	esculine		1,0 g
	citrate de fer III ammoniacal		0,5 g
	chlorure de lithium		3,0 g
	acide nalidixique		0,02 g
	acriflavine (chlorhydrate)		0,025 g
	chlorure de sodium		20,0 g
	hydrogénophosphate de sodium		9,6 g
	dihydrogénophosphate de potassium		1,3 g
	pH =7,1	

Préparation :

57,4 g par litre. Autoclavage classique.Ajouter le supplément (ammonium-ferIII-citrate, acide nalidixique, acriflavine) après refroidissement à 50°C.

Lecture :


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Bryant_et_Burkey_(bouillon)

Usage : numération des spores de Clostridium butyriques (en particulier dans les fromages)

Composition :

	tryptone	15,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	extrait de viande	7,5 g
	chlorhydrate de cystéine	0,5 g
	lactate de sodium	5,0 g
	éthanoate (acétate) de sodium	5 g
	pH = 5,9	

Préparation :

38 g de poudre par litre.Autoclavage classique.

Lecture :

Les milieux régénérés sont inoculés avec 1 ml de produit ou de dilution. Les recouvrir de paraffine stérile. Chauffer à 75°C pendant 15 min. pour éliminer les formes végétatives et activer les spores. Incuber durant 7 jours.

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Cétrimide_(Gélose_au)

Usage : Isolement de Pseudomonas aeruginosa

Composition :

	peptone de gélatine	16,0 g
	peptone de caséine	10,0 g
	bromure de tétradonium (cétrimide)	0,2 g
	acide nalidixique	15,0 mg
	sulfate de potassium	10,0 g
	chlorure de magnésium	1,4 g
	agar	10,0 g
	pH = 7,1	

Préparation :

24,2 g par litre.Dans certaines compositions le cétrimide est présent avant autoclavage. Dans d'autres il est ajouté avec l'acide nalidixique qui est parfois absent.

Lecture :


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Chapman_(Gélose_de)

Usage : isolement des Staphylococcus

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande de boeuf	1,0 g
	chlorure de sodium	75,0 g
	mannitol	10,0 g
	rouge de phénol	0,025 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

111 g par litre de milieu Autoclavage classique.

Lecture :

Cultivent sur ce milieu les Micrococcaceae et quelques autres (Bacillus, Enterococcus ) et même très rarement des bacilles Gram -colonies rouges : mannitol -colonies jaunes : mannitol +La culture démontre que la bactérie cultive en milieu hypersalé.

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Chocolat_enrichie_+_bacitracine_(Gélose)

Usage : isolement sélectif des Haemophilus

Composition :

	peptone trypsique de caséine	7,5 g
	peptone pepsique de viande	7,5 g
	amidon de maïs	1,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	4,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hémoglobine	10,0 g
	supplément glucosé, vitaminé  type Polyvitex	1 ml
	Bacitracine	50 kUI
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Bacitracine et supplément sont ajoutés dans la milieu liquide à 45°C.Cette gélose peut être préparée avec une base Columbia additionnée d'hémoglobine soluble. Autoclavage classique.

Lecture :


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Chocolat_enrichie_+_VCN_(ou_VCF)_(Gélose)

Usage : isolement sélectif des Neisseria pathogènes

Composition :

	peptone trypsique de caséine	7,5 g
	peptone pepsique de viande	7,5 g
	amidon de maïs	1,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	4,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hémoglobine	10,0 g
	supplément glucosé, vitaminé  type Polyvitex	1,0 mL
	Vancomycine	3,0 mg
	Colimycine	7,5 mg
	Fungizone	2,0 mg
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Antibiotiques et supplément sont ajoutés dans la milieu liquide à 45°C.

Lecture :


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Chocolat_supplémentée_(Gélose)

Usage : isolement de germes exigeants cultivant mal sur gélose au sang(Neisseria, Haemophilus )

Composition :

	peptone trypsique de caséine	7,5 g
	peptone pepsique de viande	7,5 g
	amidon de maïs	1,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	4,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hémoglobine	10,0 g
	supplément glucosé, vitaminé  type Polyvitex	1,0 mL
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Le supplément sont ajoutés dans la milieu liquide à 45°C.

Lecture :

Cette gélose peut être utilisée pour montrer la culture d'un Haemophilus en présence de l'hémine provenant de l'hémoglobine et de NAD provenant du supplément.

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Chocolat_non_supplémentée_(Gélose)

Usage : généralement utilisée avec supplément. Identification des Haemophilus.

Composition :

	peptone trypsique de caséine	7,5 g
	peptone pepsique de viande	7,5 g
	amidon de maïs	1,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	4,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hémoglobine	10,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Prêt à couler.Il est possible de le préparer à partir d'une base Columbia et d'hémoglobine soluble.

Lecture :

Cette gélose peut être utilisée pour montrer la culture d'un Haemophilus en présence de l'hémine provenant de l'hémoglobine. Ce milieu ne contient pas de NAD.

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Citrate_de_Christensen

Usage : utilisation du citrate en milieu complexe

Composition :

	extrait de levure	0,5 g
	monochlorhydrate de cystéine	0,1 g
	glucose	0,2 g
	citrate de sodium	3,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	rouge de phénol	0,012 g

Préparation :

Milieu liquide prêt à l'emploi.

Lecture :

Coloration rose-rouge : citrate + Coloration jaune : citrate moins (glucose +)

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Citrate_de_Simmons

Usage : utilisation du citrate comme seule source de carbone

Composition :

	citrate de sodium	1,0 g
	bleu de bromothymol	0,08 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	sulfate de magnésium	0,2 g
	hydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	dihydrogénophosphate d'ammonium	1,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,1	

Préparation :

23 g par litre.Stérilisation classique.Conditionnement en tubes inclinés.

Lecture :

Les bactéries utilisant le citrate comme seule source de carbone bleuissent normalement le milieu (alcalinisation)les bactéries ne l'utilisant pas ne cultivent pas.Toutefois, des bactéries peuvent utiliser le citrate comme seul source de carbone sans bleuir. (Enterococcus)ATTENTION : le bouchon doit être débouché pour l'incubation.

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Clark_et_Lubs_(Bouillon)

Usage : test du VP et du RM

Composition :

	peptone	5,0 g
	glucose	5,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	5,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

15 g par litre.Stérilisation classique ou par filtration.

Lecture :

Après addition d'hydroxyde de sodium ou de potassium et de napht-1-ol (il semble qu'il vaille mieux d'abord mette le napht-1-ol) sur un aliquote du milieu : coloration rose (VP+) ou non (VP -).Il peut être nécessaire de chauffer le milieu et de l'incliner pour assurer une bonne aération. Attention : la réaction peut prendre 10 min.

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CLED_(Gélose)

Usage : isolement ou numération des urines (CLED = Cystine Lactose Electrolyt deficient)

Composition :

	peptone	4,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	peptone pepsique de viande	4,0 g
	L-Cystine	0,128 g
	lactose	10,0 g
	bleu de bromothymol	0,02 g
	agar	13,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

34,2 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Colonies jaunes : lactose +Colonies bleues ou vertes : lactose -La faible teneur en ions permet d'éviter l'envahissement par Proteus.

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Coeur-Cervelle

Usage : milieu polyvalent riche utilisé pour la coagulase et la DNAse des Staphylococcus

Composition :

	protéose-peptone	10,0 g
	infusion de cervelle de veau	12,5 g
	infusion de coeur de boeuf	5,0 g
	glucose	2,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hydrogénophosphate de sodium	2,5 g
	pH = 7,4	

Préparation :

37 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Bouillon riche.

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Coletsos

Usage : isolement des Mycobactéries tuberculeuses

Composition :

	Asparagine	2,25 g
	Glutamate de sodium	1,0 g
	osséine (gélatine ou collagène d'os)	4,0 g
	Oeufs entiers (0,8) et jaunes (0,2)	625 ml
	glycérol	7,5 ml
	Citrate de magnésium	0,375 g
	Pyruvate de sodium	1,0 g
	Fécule de pomme de terre	10,0 g
	poudre d'anthracite	0,1 g
	vert malachite	0,25 g
	bleu de tournesol	0,25 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,5 g
	sulfate de magnésium	0,15 g
	mélange d'oligoéléments	0,003 g

Préparation :

Milieu très complexe qu'il vaut mieux acheter tout prêt !

Lecture :


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Coletsos

Usage : isolement des Mycobactéries (en particuliers tuberculeuses)

Composition :

	oeufs entiers et jaunes (80%-20%)	625 ml
	asparagine	2,25 g
	glutamate de sodium	1,0 g
	fécule de pomme de terre	10,0 g
	glycérol	7,5 ml
	citrate de magnésium	0,375 g
	pyruvate de sodium	1,0 g
	vert malachite	0,25 g
	osséine	4,0 g
	poudre d'anthracite	0,1 g
	bleu de tournesol	0,25 g
	sulfate de magnésium	0,15 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,5 g
	mélange d'oligo-éléments	3 mg
	pH = 	

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi.

Lecture :


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Columbia_(Gélose)

Usage : milieu d'isolement, base de gélose au sang

Composition :

	mélange spécial de peptones	23,0 g
	Amidon	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	10,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

42,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

gélose relativement riche.Elle peut être additionnée de nombreux suppléments pour la rendre sélective de groupes bactériens.

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Columbia_au_sang_+_ANC

Usage : isolement sélectif des Streptococcus

Composition :

	mélange spécial de peptones	23,0 g
	Amidon	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	10,0 g
	sang	50,0 ml
	acide nalidixique	15,0 mg
	colimycine	15,0 mg
	pH = 7,3	

Préparation :

42,5 g par litre.Stérilisation classique.Le sang est ajouté après retour de la gélose à 45°C. Les antibiotiques peuvent être inclus dans la poudre ou ajoutés comme le sang.

Lecture :

Colonies entourées d'un halo clair : béta-hémolyseColonies entourées d'un halo verdâtre : alpha-hémolyse.Autres colonies : hémolyse négativeLes bactéries de ces colonies sont résistantes à l'acide nalidixique et à la colimycine.

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Columbia_au_sang

Usage : milieu d'isolement de bactéries exigeantes n'ayant pas besoin de facteurs particuliers comme Haemophilus)

Composition :

	mélange spécial de peptones	23,0 g
	Amidon	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	10,0 g
	sang	50 ml
	pH = 7,3	

Préparation :

42,5 g par litre.Stérilisation classique.Le sang est ajouté stérilement dans le milieu stérile en surfusion.On peut réaliser une gélose au sang cuit si le milieu est maintenu à 75-80°C.

Lecture :

Colonies entourées d'un halo clair : béta-hémolyseColonies entourées d'un halo verdâtre : alpha-hémolyse.Autres colonies : hémolyse négative

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Conservation_(gélose_pour)

Usage : conservation de souches de bactéries de culture facile.

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	10,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

prêt à l'emploi en petits tubes fins.

Lecture :


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CTA_(milieu)

Usage : étude de la voie d'attaque des glucides et éventuellement la mobilité

Composition :

	tryptone	20,0 g
	L-Cystine	0,5 g
	rouge de phénol	17 mg
	chlorure de sodium	5,0 g
	sulfite de sodium	0,5 g
	agar	2,5 g
	pH = 7,3	

Préparation :

28,5 g par litre. Autoclavage classique.Ajouter avant ou après autoclavage le glucide à raison d'une concentration finale de 10 g par litre.

Lecture :

Ce milieu est utilisé pour la mise en évidence du type respiratoire. L'observation de l'acidification éventuelle sur toute la hauteur du tube ensemencé en piqûre centrale permet de conclure. L'ensemencement de deux tubes dont un recouvert de vaseline stérile est inutile.Ce milieu sera préféré à Hugh et Leifson pour des bactéries de culture difficile ou lente (anaérobies strictes et coques Gram +)Les Entérobactéries peuvent parfois réalcaliniser rapidement le milieu en surface. La conclusion neposera totefois aucun problème.

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DCL_(gélose)_(Désoxycholate-Citrate-Lactose)_(milieu_de_Hynes)

Usage : isolement des Salmonella-Shigella

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	lactose	10,0 g
	citrate de sodium	8,5 g
	citrate de fer III	1,0 g
	désoxycholate de sodium	5,0 g
	rouge neutre	0,020 g
	thiosulfate de sodium	5,4 g
	agar	12,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

52 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Les colonies sont des colonies de bacilles Gram -.Colonies rouges : lactose +Colonies incolores ou jaunes : lactose -Colonies à centre noir : H2S +Colonies sans centre noir : H2S -

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Dénombrement_(Gélose_pour)_(PCA)

Usage : dénombrement des germes en microbiologie des aliments

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de levure	2,5 g
	glucose	1,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7	

Préparation :

23,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :


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Dénombrement_des_Coliformes_0,1_%

Usage : dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire

Composition :

	peptone	10,0 g
	citrate de sodium	1,0 g
	lactose	10,0 g
	rouge neutre	0,03 g
	désoxycholate de sodium	1,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	2,0 g
	agar	13,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

43 g par litreil est préférable de dissoudre à 100°C et de ne pas autoclaver

Lecture :

Les colonies sont des colonies de bacilles Gram -. Des Enterococcus peuvent cultiver sur ce milieu.Colonies rouges : lactose +Colonies incolores ou jaunes : lactose -Certaines compositions (Diagnostics Pasteur) ajoutent du citrate de fer III.

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Désoxycholate-Citrate-Lactose-Saccharose

Usage : isolement des Salmonella-Shigella

Composition :

	peptone (mélange spécial)	10,0 g
	lactose	5,0 g
	saccharose	5,0 g
	citrate de sodium	10,5 g
	désoxycholate de sodium	2,5 g
	rouge neutre	0,03 g
	thiosulfate de sodium	5,0 g
	agar	12,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

50 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Les colonies sont des colonies de bacilles Gram -.Colonies rouges : lactose +Colonies incolores ou jaunes : lactose -(si la composition inclut du fer III un centre noir révèle la production d'H2S)

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Drigalski_(gélose)

Usage : isolement des bacilles Gram- de culture facile

Composition :

	peptone	15,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	lactose	15,0 g
	désoxycholate de sodium	1,0 g
	cristal violet	0,005 g
	bleu de bromothymol	0,080 g
	thiosulfate de sodium	1,0 g
	agar	11,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

49 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Les colonies sont des colonies de bacilles Gram -.Colonies jaunes : lactose +Colonies vertes ou bleues : lactose -

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Dubos_(bouillon_de)

Usage : culture de Mycobactéries

Composition :

	autolysat de caséine	2,0 g
	asparagine	2,0 g
	fraction V du plasma bovin	5,0 g
	glucose	5,0 g
	tween 80	0,5 g
	citrate de fer III et d'ammonium	0,05 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,0 g
	hydrogénophosphate de sodium	6,3 g
	sulfate de magnésium	0,01 g
	chlorure de calcium	0,5 mg
	sulfate de zinc	0,1 mg
	sulfate de cuivre	0,1 mg

Préparation :

milieu prêt à l'emploi

Lecture :

Ce miliue permet d'obtenir des subcultures de Mycobactéries à partir de l'isolement.

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Eau_peptonée

Usage : recherche de l'indole

Composition :

	peptone exempte d'indole	10,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

15 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

L'addition de réactif de Kovacs montre la production d'indole par un anneau rouge.

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EMB_(gélose)_(milieu_de_Lévine)

Usage : isolement des bacilles Gram négatif

Composition :

	peptone	10,0 g
	lactose	10,0 g
	éosine	0,4 g
	bleu de méthylène	0,065 g
	hydrogénophosphate de potassium	2,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

37,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

L'utilisation du lactose se traduit par un centre foncé ou un aspet métallique des colonies. Dans le cas contraire les colonies sont incolores. Les colonies sont normalement des bacilles Gram négatifs mais quelques Gram + peuvent cultiver de façon limitée.

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EMB_saccharosé_(gélose)_(milieu_de_Teague)

Usage : isolement des bacilles Gram négatif

Composition :

	peptone	10,0 g
	lactose	5,0 g
	saccharose	5,0 g
	éosine "jaune"	0,4 g
	bleu de méthylène	0,065 g
	hydrogénophosphate de potassium	2,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

34,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

L'utilisation d'un des glucides se traduit par un centre foncé ou un aspet métallique des colonies. Dans le cas contraire les colonies sont incolores. Les colonies sont normalement des bacilles Gram négatifs mais quelques Gram + peuvent cultiver de façon limitée.

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ENDO_(milieu)

Usage : isolement des Entérobactéries de produits alimentaires et contrôle de stérilité.

Composition :

	peptone	10,0 g
	Lactose	10,0 g
	fuchsine basique à 10 % dans l'éthanol	4,0 ml
	hydrogénophosphate de potassium	3,5 g
	sulfite de sodium	10,0 g
	Agar	15,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

36 g de poudre par litre. Ajouter la fuchsine basique.Autoclavage classique.

Lecture :

colonies rouges à éclat métallique : lactose +colonies transparentes : lactose -

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Esculine_(gélose)

Usage : étude de l'hydrolyse de l'esculine

Composition :

	peptone	10,0 g
	esculine	1,0 g
	citrate de fer ammoniacal	1,0 g
	agar	20,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

45 g par litre.Autoclavage classique.

Lecture :

Colonies noires : esculine +Il est possible de différencier une éventuelle production d'H2S par la disparition de la fluorescence de l'esculine.

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Extrait_de_malt_(gélose_à_l')

Usage : isolement ou numération des champignons

Composition :

	extrait de malt	30,0 g
	Agar	12,0 g
	pH = 5,5	

Préparation :

42 g de poudre par litre.Autoclavage classique.

Lecture :

Ce milieu peut être acidifié par addition d'acide lactique à 85 % dans le milieu en surfusion.Certains fabricants ajoutent 5,0 g de peptone mycologique.

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Gélatine_nutritive

Usage : étude de l'hydrolyse de la gélatine.

Composition :

	extrait de viande	3,0 g
	peptone	5,0 g
	gélatine	120,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

128 g par litre. Autoclavage classique.Refroidir en dessous de 20°C pour solidifier.

Lecture :

Ajouter après culture une solution de chlorure de mercure III.L'absence de précipité autour des colonies traduit l'absence de gélatine (protéine appelée aussi collagène) donc la protéolyse par la bactérie. (gélatinase +).Il est plus simple d'utiliser la technique à la pellicule photo ou la gélatine de Köhn.

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Nutritive_(gélose)

Usage : milieu d'isolement courant

Composition :

	extrait de viande	1,0
	extrait de levure	2,0
	peptone	5,0
	chlorure de sodium	5,0
	Agar	15,0
	pH = 7,4	

Préparation :

28 g par litreStérilisation à l'autoclave

Lecture :

La gélose peut être additionnée de sang.

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Glucosé_tamponné_(bouillon)

Usage : culture des Streptococcus

Composition :

	tryptone	20,0 g
	glucose	2,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	dihydrogénophosphate de sodium	2,5 g
	pH = 7,3	

Préparation :

29,5 g par litre. Autoclavage classique.

Lecture :

Bouillon riche.

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GVPC_(gélose_pour_Legionella)

Usage : isolement sélectif de Legionella à partir de l'eau eou de l'environnement

Composition :

	extrait de levure	10,0 g
	L-Cystéine chlorhydrate	0,4 g
	alpha-cétoglutarate	1,0 g
	glycocolle	3,0 g
	polymyxine B	80 kUI
	vancomycine	1 mg
	cycloheximide	80 mg
	pyrophosphate de fer III	10 mg
	tampon ACES/ hydroxyde	0,25 g
	charbon activé	10 g
	agar	2,0 g
	pH = 6,9	

Préparation :

à la gélose de base CYE sont ajoutés les suppléments de croissance et inhibiteurs thermosensibles.

Lecture :


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Hektoen_(gélose)

Usage : isolement des Salmonella, Shigella, Yersinia

Composition :

	protéose-peptone	12,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	lactose	12,0 g
	saccharose	12,0 g
	salicine	2,0 g
	citrate de fer III et d'ammonium	1,5 g
	sels biliaires	9,0 g
	fuchsine acide	0,1 g
	bleu de bromothymol	0,065 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	thiosulfate de sodium	5,0 g
	agar	13,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

75 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Les colonies sont normalement des colonies de bacilles Gram négatif.Les colonies à centre noir sont H2S +.Les colonies bleues ou vertes n'utilisent aucun des glucides du milieu. Elles sont donc saccharose et salicine et lactose négatives. La couleur bleue peut être due à l'utilisation du citrate.Les colonies jaunes utilisent un ou plusieurs des glucides. Elles sont donc saccharose et/ou lactose et/ou salicine positives.Un précipité de sels biliaires peut apparaître pour les souches acidifiantes.

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Hoyle_(milieu)

Usage : Corynebacterium diphteriae

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande de boeuf	10,0 g
	sang laqué	50 ml
	tellurite de sodium	0,35 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,8	

Préparation :

40 g par litre. Autoclavage classique.Ajouter ensuite 50 ml de sang laqué par litre et 10 ml de tellurite à 35 g par litre.

Lecture :


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Hugh_et_Leifson

Usage : détermination de la voie d'attaque des glucides

Composition :

	tryptone	2,0 g
	bleu de bromothymol	30 mg
	chlorure de sodium	5,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	0,3 g
	agar	2,5 g
	pH = 7,1	

Préparation :

9,8 g par litre. Autoclavage classique.Le glucide à tester est ajouter avant ou après autoclavage à la concentration finale de 10 g par litre.

Lecture :

Ce milieu est utilisé pour la mise en évidence du type respiratoire. L'observation de l'acidification éventuelle sur toute la hauteur du tube ensemencé en piqûre centrale permet de conclure. L'ensemencement de deux tubes dont un recouvert de vaseline stérile est inutile.Certaines bactéries (anaérobies strictes, coques Gram +) cultivent mal sur ce milieu : on lui préférera alors CTA.

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Hypertonique_(bouillon)_(hypersalé)

Usage : identification des Enterococcus

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	tryptose	5,0 g
	chlorure de sodium	65,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

80 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

La culture montre que la bactérie inoculée cultive en présence d'une forte concentration saline.L'absence de culture traduit la sensibilité à cette forte concentration saline.(pour des bactéries de culture difficile, il est possible de fabriquer un tel milieu à partir d'une base plus riche)

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King_A

Usage : mise en évidence de la pyocyanine de Pseudomonas aeruginosa

Composition :

	peptone dite "A"	20,0 g
	glycérol	10,0 g
	sulfate de potassium	10,0 g
	chlorure de magnésium	1,4 g
	agar purifié	12,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

45 g de poudre par litre.Stérilisation classique.Ajouter 10 cm3 de glycérol après autoclavage.

Lecture :

La pyocyanine bleuit le milieu. Elle est soluble dans le trichlorométhane (chloroforme).Une coloration rouge traduit la production de pyorubine.

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King_B

Usage : mise en évidence de la pyoverdine des Pseudomonas du groupe fluorescent

Composition :

	peptone dite "B"	20,0 g
	glycérol	10,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	1,5 g
	sulfate de magnésium heptahydraté	1,5 g
	agar purifié	12,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

37 g de poudre par litre.Stérilisation classique.Ajouter 10 cm3 de glycérol après autoclavage.

Lecture :

La pyoverdine jaunit le milieu. Cette molécule présente une fluorescence à 340 nm. Elle est insoluble dans le trichlorométhane (chloroforme).

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Kristensen_(gélose_lactosée_au_vert_brillant_et_au_rouge_de_phénol)

Usage : isolement des Salmonella sauf typhi

Composition :

	protéose-peptone	10,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	lactose	10,0 g
	saccharose	10,0 g
	vert brillant	0,0125 g
	rouge de phénol	0,08 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	12,0 g
	pH = 6,9	

Préparation :

50 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Les bactéries cultivant sur ce milieu sont des bacilles Gram -. Certains sont inhibés comme Salmonella typhi.Colonies jaunes : lactose + et/ou saccharose +Colonies rouges : lactose - et sacharose -

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Lactosé_au_BCP_+_cloche

Usage : Dénombrement des coliformes dans les eaux

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	lactose	5,0 g
	Bromocrésol pourpre	25,0 mg
	pH = 6,9	

Préparation :

15,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Le virage au jaune du milieu traduit la fermentation du lactose.La production de gaz de fermentation du lactose est révélée par la cloche.Encore faut-il que le milieu ait été agité correctement pour que les bactéries soient bien réparties, y compris sous la cloche Ce milieu peut être utilisé à double concentration pour les grands volumes d'eau. Toutefoisle dénombrement des coliformes sera fait de préférence par filtration.

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Lactosé_bilié_au_vert_brillant_+_cloche_(BLBVB)

Usage : Dénombrement des Coliformes

Composition :

	peptone	10,0 g
	lactose	10,0 g
	bile	20,0 ml
	vert brillant	13,0 mg
	pH = 7,4	

Préparation :

40 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

La cloche permet le recueil des gaz signant la présence d'un coliforme. Encore faut-il que le milieu ait été agité correctement pour que les bactéries soient bien réparties, y compris sous la cloche

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Lactose-Glucose-H2S_(Kligler-Hajna)

Usage : utilisation du lactose, fermentation du glucose, production d'H2S

Composition :

	peptone	15,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	peptone pepsique de viande	5,0 g
	glucose	1,0 g
	lactose	10,0 g
	rouge de phénol	0,024 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	sulfate de fer II (Pasteur)	0,2 g
	thiosulfate de sodium	0,3 g
	agar	11,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

53,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Pente jaune : lactose +, Pente rouge : lactose -Culot jaune : glucose + et aéro-anaérobie. Culot rouge : glucose - ou aérobie stricte.Présence d'un précipité noir : H2S +

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Lactosée_au_Tergitol_7_et_au_TTC_(Gélose)

Usage : Dénombrement des Coliformes après filtration sur membrane

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	extrait de levure	6,0 g
	lactose	20,0 g
	tergitol 7	10 mg
	TTC	25 mg
	Bleu de bromothymol	50 mg
	agar	13,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

54,15 g par litre.Stérilisation classique.Le tergitol est ajouté dans le milieu en surfusion à 45°C.

Lecture :

colonies bleues ou vertes : lactose -.colonies jaunes : lactose +La réduction du TTC en composé rouge est faible avec Escherichia coli et Enterobacter aerogenes qui donnent donc des colonies jaunes alors que celles des autres coliformes seront rose-rouges et entourées d'un halo jaune.Le tergitol 7 limite l'envahissement par Proteus.

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LDC

Usage : recherche de la LDC

Composition :

	extrait de levure	3,0 g
	L-lysine (monochlorhydrate)	5,0 g
	glucose	1,0 g
	bromocrésol pourpre	0,16 mg
	éthanol	1,0 ml
	chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

Le milieu est acheté prêt à l'emploi ou fabriqué à partir des différents constituants. Il est indispensable de contrôler le pH. Pour utiliser la forme DL de l'acide aminé il est indispensable de doubler la dose. Autoclavage classique.

Lecture :

L'alcalinisation avec culture montre la présence d'une LDC. (violet)Un milieu acide montre la fermentation du glucose et l'absence de la LDC.Une absence de culture est possible pour une bactérie aérobie stricte ou très exigeante.

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Litsky_(milieu_de)

Usage : confirmation d'Enterococcus (Microbiologie alimentaire)

Composition :

	peptone	20,0 g
	glucose	5,0 g
	azide	0,2 g
	éthyl-violet	0,5 g
	NaCl	5,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	2,7 g
	dihydrogénophosphate de potassium	2,7 g
	pH = 6,8	

Préparation :

35,7 g par litre. Autoclavage classique

Lecture :

Ce milieu permet l'enrichissement en Entérocoques d'un inoculum de produit alimentaire.Un trouble signe la présence éventuelle de ces bactéries qu'il faudra ensuite confirmer par le test de Litsky, l'isolement et l'identification des colonies.

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Lowenstein-Jensen

Usage : isolement des Mycobactéries (en particuliers tuberculeuses)

Composition :

	oeufs entiers	625 ml
	asparagine	2,25 g
	fécule de pomme de terre	18,75 g
	glycérol	7,5 ml
	citrate de magnésium	0,375 g
	vert malachite	0,25 g
	sulfate de magnésium	0,15 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,5 g
	pH = 	

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi.

Lecture :


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Lysine_Fer

Usage : mise en évidence de la LDC et de la LDA pour des bactéries fermentant le glucose

Composition :

	peptone de gélatine	5,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	L-lysine	10,0 g
	glucose	1,0 g
	citrate de fer III ammoniacal	0,5 g
	Bromocrésol pourpre	20,0 mg
	thiosulfate de sodium	40,0 mg
	agar	13,5 g
	pH = 6,7	

Préparation :

34 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en tube inclinés commele milieu de Kligler Hajna.

Lecture :

Culot jaune : glucose fermenté, LDC -Culot violet : glucose probablement fermenté mais masqué par la LDC +.Pente violette : LDA -Pente rouge vineuse : LDA +Précipité noir : H2S +(certaines bactéries LDA + H2S + apparaissent H2S -)

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M17_(gélose)

Usage : culture des Lactococcus

Composition :

	tryptone	5,0 g
	peptone de soja	5,0 g
	infusion de viande	5,0 g
	extrait de levure	2,5 g
	glycérohydrogénophosphate de sodium	19,0 g
	lactose	5,0 g
	acide ascorbique	0,5 g
	sulfate de magnésium	0,25 g
	agar	11,0 g
	pH = 6,9	

Préparation :

48,25 g de poudre dans 950 ml d'eau distillée. Autoclavage classique.Ajouter extemporanément 50 ml de solution de lactose à 100 g par litre.

Lecture :


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Mac_Conkey_n°2_(Gélose)

Usage : isolement des gram - et des Enterococcus

Composition :

	peptone	20,0 g
	lactose	10,0 g
	sel biliaires n°2	1,5 g
	cristal violet	0,001 g
	rouge neutre	0,05 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	15,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

51,5 g par litre d'eau distilléeStérilisation à l'autoclave.

Lecture :

colonies rouges : lactose +colonies jaunes ou incolores : lactose -Les colonies de bacilles Gram - sont relativement grosses tandis que celle d'Enterococcus ont environ 1 mm de diamètre.

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Mac_Conkey_n°3_(Gélose)

Usage : isolement des bacilles Gram -

Composition :

	peptone	20,0 g
	lactose	10,0 g
	sel biliaires n°2	1,5 g
	cristal violet	0,001 g
	rouge neutre	0,05 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	15,0 g

Préparation :

51,5 g par litreStérilisation à l'autoclave.

Lecture :

colonies rouges : lactose +colonies jaunes ou incolores : lactose -Seuls les bacilles Gram - cultivent sur ce milieu en raison des sels biliaires n°3 plus inhibiteurs que les n°2 et qui permettent d'éliminer les Enterococcus.

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Mannitol-Mobilité-Nitrate

Usage : utilisation du mannitol, réduction des nitrates, mobilité en gélose semi-molle

Composition :

	hydrolysat trypsique de caséine	10,0 g
	mannitol	7,5 g
	rouge de phénol	0,4 mg
	nitrate de potassium	1,0 g
	agar	3,5 g
	pH = 7,6	

Préparation :

22 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

milieu jaune : mannitol +milieu rouge : mannitol -Pour une bactérie aérobie stricte, la culture sur toute la hauteur accompagnée éventuellement de bulles montre une respiration nitrate.La réduction des nitrates pourra être visualisée par addition des réactifs habituels. Leur acidité entraîne un virage progressif au jaune d'un milieu rouge : une coloration rouge après addition des nitrite 1 et 2 montre donc bien la présence de nitrites.

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Mossel_(Gélose)_pour_Bacillus_cereus

Usage : dénombrement de Bacillus cereus dans les produits alimentaires

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Extrait de viande	1,0 g
	Mannitol	10,0 g
	Jaune d'oeuf à 20 %	10 %
	Sulfate de Polymyxine B	0,01 g
	Rouge de phénol	0,025 g
	Chlorure de sodium	10,0 g
	Agar	14,0 g
	pH=7,2	

Préparation :

40 g par litre.Autoclavage classique.Le jaune d'oeuf est ajouté après stérilisation du milieu à l'autoclave dans le milieu en surfusion à raison de 10 % environ de l'émulsion à 20 %.

Lecture :

Les colonies rouges sont mannitol -Les colonies jaunes sont mannitol +.Les colonies entourées d'un halo de précipitation sont lécithinase +. En règle générale, le halo trouble dépasse le halo clair dû à la lipo-protéinase pour Bacillus cereus.Les bactéries cultivant résistent à la polymyxine.

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Mox_(Gélose_OXFORD_modifiée_au_moxalactam)

Usage : Isolement sélectif des Listeria

Composition :

	gélose Columbia modifiée		38,1 g
	esculine	1,0 g	1,0 g
	citrate de fer III ammoniacal		0,50 g
	colistine		0,01 g
	moxalactam		0,02 g
	chlorure de lithium		15,00 g
	pH = 7,2	

Préparation :

55,5 g de poudre par litre. Autoclavage classique.Le moxalactam (et la colistine pour certains fabricants) est ajouté après autoclavage.

Lecture :

halo noir autour des colonies : utilisation de l'esculine.Listeria est pratiquement la seule bactérie à cultiver : seuls quelques Enterococcus peuvent être rencontrés.incubation conseillée : 24 à 48 h

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MRS_(Gélose_de_Man,_Rogosa,_Sharpe)

Usage : culture des bactéries lactiques

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	8,0 g
	extrait de levure	4,0 g
	Glucose	20,0 g
	Acétate de sodium trihydraté	5,0 g
	Citrate d'ammonium	2,0 g
	Tween 80	1,0 ml
	hydrogénophosphate de potassium	2,0 g
	sulfate de magnésium heptahydraté	0,2 g
	sulfate de manganèse tétrahydraté	0,05 g
	Agar	10,0 g
	pH = 6,2	

Préparation :

62 g par litreStérilisation à l'autoclave.

Lecture :

Milieu permettant une bonne culture des Lactobacillus.Il existe un bouillon équivalent.

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Mueller-Hinton_(Gélose)

Usage : Gélose riche pour la réalisation de l'antibiogramme standard

Composition :

	infusion de viande de boeuf	300,0 ml
	peptone de caséine	17,5 g
	amidon de maïs	1,5 g
	agar	17,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

38 g par litre.Stérilisation à l'autoclave.

Lecture :

Cette gélose standardisée est la gélose permettant de tester l'action des antibiotiques sur les bactéries. Elle peut être additionnée de sang (pour les Streptococcus ), d'extrait globulaire (pour Haemophilus ), Elle doit être coulée en boîte de façon à obtenir une épaisseur de 4 mm. Il existe un bouillon équivalent.

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Muller-Kauffmann_(bouillon_de_base_au_tétrathionate)

Usage : Bouillon d'enrichissement en Salmonella

Composition :

	tryptone	7,0 g
	peptone de soja	2,3 g
	bile de boeuf	4,8 g
	vert brillant	9,5 mg
	chlorure de sodium	2,3 g
	thiosulfate	24,0 g
	tétrathionate	6,7 g
	sodium	11,8 g
	potassium	1,15 g
	iodures	7,4 g
	iode	0,0 g
	carbonate de calcium	25,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

82 g de poudre de base sont dissoutes par ébullition.On ajoute ensuite 20 ml d'une solution iodo-iodurée (250 g IK et 200 g d'Iode par dm3 préparée en dissolvant l'iode dans l'iodure)On ajoute enfin 9,5 ml d'une solution de vert brillant à 1 g par dm3.

Lecture :

La composition donnée ici est calculée en fonction des ajouts de molécules réagissant entre elles (Iode sur thiosulfate).Ce milieu permet l'enrichissement en Salmonella (mais pas en Shigella) par ralentissement de la croissance des autres bactéries par rapport à Salmonella.

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Nitraté_(bouillon)

Usage : détermination du type respiratoire des micro-organismes.

Composition :

	infusion coeur-cervelle	25,0 g
	nitrate de sodium	10,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

35 g par litre.Autoclavage classique.

Lecture :

Après avoir vérifié la présence de culture, ajouter les réactifs Nitrite 1 et 2. Une coloration rouge signe la présence de nitrites. (bactérie nitrate réductase + stade nitrites).En cas de milieu incolore ajouter le zinc réducteur des nitrates. Attendre quelques minutes. Une coloration rouge montre la présence de nitrites : la bactéries est Nitrate réductase -. Une absence de coloration montre l'absence de nitrates : la bactérie les a réduit en azote.

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Nitrité_(bouillon)

Usage : détermination du type respiratoire des micro-organismes.

Composition :

	infusion coeur-cervelle	25,0 g
	nitrite de sodium	10,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

35 g par litre.Autoclavage classique.La solution de nitrites stérilisée par filtration peut aussi être ajoutée juste avant emploi.

Lecture :

Après avoir vérifié la présence de culture, ajouter les réactifs Nitrite 1 et 2. Une coloration rouge signe la présence de nitrites: bactérie nitrite réductase -. L'absence de coloration signe la réduction par la bactérie des nitrites en azote.L'addition d'une cloche ou de gélose permet la mise en évidence du gaz.

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ODC

Usage : recherche de la ODC

Composition :

	extrait de levure	3,0 g
	L-ornithine (monochlorhydrate)	5,0 g
	glucose	1,0 g
	bromocrésol pourpre	0,16 mg
	éthanol	1 ml
	chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

Le milieu est acheté prêt à l'emploi ou fabriqué à partir des différents constituants. Il est indispensable de contrôler le pH. Pour utiliser la forme DL de l'acide aminé il est indispensable de doubler la dose. Autoclavage classique.

Lecture :

L'alcalinisation avec culture montre la présence d'une ODC. (violet)Un milieu acide montre la fermentation du glucose et l'absence de l'ODC.Une absence de culture est possible pour une bactérie aérobie stricte ou très exigeante.

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Oxford_Curtis_(Gélose)

Usage : Isolement sélectif des Listeria

Composition :

	mélange spécial de peptones		23,0 g
	amidon de maïs		1,0 g
	esculine		1,0 g
	citrate de fer III ammoniacal		0,50 g
	acriflavine chlorhydrate		0,005 g
	cefotetan		0,002 g
	colistine sulfate		0,02 g
	cycloheximide		0,4 g
	fosfomycine		0,01 g
	éthanol 		5,0 ml
	chlorure de lithium		15,0 g
	chlorure de sodium		5,0 g
	agar		15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

55,5 g de poudre par litre d'eau distillée.Autoclavage classique. Ajouter ensuite le supplément (cycloheximide, colistine, acriflavine, céfotétan, fosfomycine en solution éthanolique)

Lecture :

Les colonies esculine + apparaissent entourées d'un halo noir.Listeria est pratiquement la seule bactérie à cultiver : seuls quelques Enterococcus peuvent être rencontrés.Incubation conseillée : 24 à 48 h

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PALCAM_(gélose)

Usage : Isolement sélectif des Listeria

Composition :

	mélange spécial de peptones		23,0 g
	amidon de maïs		1,0 g
	glucose		0,50 g
	mannitol		10,0 g
	esculine		0,80 g
	citrate de fer III ammoniacal		0,50 g
	acriflavine chlorhydrate		0,005 g
	ceftazidime		0,02 g
	polymyxine B sulfate		0,01 g
	rouge de phénol		0,09 g
	chlorure de lithium		15,00 g
	chlorure de sodium		5,00 g
	agar		15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

68,8 g de poudre par litre. Autoclavage classique.Polymyxine, acriflavine et ceftazidime sotn ajoutés ensuite à 50°C.

Lecture :

colonies rouges : mannitol -colonies janes : mannitol +halo noir autour des colonies : utilisation de l'esculine.Les Listeria apparaissent mannitol -, esculine +.Listeria est pratiquement la seule bactérie à cultiver : seuls quelques Enterococcus peuvent être rencontrés.incubation conseillée : 24 à 48 h

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PCA_standard_ou_gélose_pour_dénombrement

Usage : gélose "ordinaire" pour dénombrement en microbiologie alimentaire

Composition :

	tryptone	5,0 g
	extrait de levure	2,5 g
	glucose	1,0 g 
	agar	15,0 g 
	pH = 7,0	

Préparation :

23,5 g par litreStérilisation à l'autoclave

Lecture :

Ce milieu peut être additionné de poudre de lait écrémé si les normes du pays nécessitent cette addition.Dans le cas contraire, ce milieu convient bien au dénombrement des bactéries des produits laitiers.

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PCB_(gélose)

Usage : mise en évidence des chlamydospores de Candida albicans

Composition :

	carottes	20,0 g
	pommes de terre	20,0 g
	bile de boeuf	150 ml
	agar	25,0 g

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi qu'il est possible de préparer avec les constituants de base après son marché.

Lecture :

Couler le milieu en petites boîtes. Faire une strie de la souche et recouvrir d'une lamelle stérile. Incuber à 28°C. Observer au microscope après culture.

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Phényl-alanine_(gélose)

Usage :

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de viande de boeuf	3,0 g
	L-Phényl-alanine	0,5 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

Ajouter la phénylalanine dans une gélose ordinaire puis autoclaver. En cas de forme DL doubler la quantité. Conditionner en tube incliné.

Lecture :

Après culture, ajouter la solution de chlorure de fer III : une coloration verte (disparaissant rapidement) signe la présence d'acide phényl-puruvique.

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Rappaport_Vassiliadis_(bouillon)

Usage : bouillon d'enrichissement en Salmonella

Composition :

	peptone de soja	4,5 g
	vert malachite	36 mg
	chlorure de sodium	7,2 g
	dihydrogénophosphate de potassium	1,5 g
	chlorure de magnésium hexahydraté	37,3 g
	pH = 5,2 	

Préparation :

51 g par litre.Autoclavage classique.

Lecture :


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RAT

Usage : mise en évidence des chlamydospores de Candida albicans

Composition :

	extrait de riz déshydraté	2,5 g
	tween 80	10,0 ml
	agar	10,0 g
	pH = 6,6	

Préparation :

Milieu prêt à l'emploi.

Lecture :

Couler le milieu en petites boîtes. Faire une strie de la souche et recouvrir d'une lamelle stérile. Incuber à 28°C. Observer au microscope après culture.

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Rosenow

Usage : Bouillon utilisé pour les anaérobies

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	chlorhydrate de cystéine	0,3 g
	Glucose	2,0 g
	marbre blanc 1 morceau par tube	
	Cervelle lyophilisée 1 morceau par tube	
	indicateur d'Andrade (fuchsine acide 5 %)	10,0 ml
	chlorure de sodium	5,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

21 g par litre.ajouter un morceau de marbre et un morceau de cervelle par tube.Autoclavage classique.

Lecture :

Le milieu doit être utilisé dans les 15 jours suivant la préparation. Il peut être congelé.Avant utilisation il doit être régénéré.Après ensemencement il doit être recouvert de paraffine.La fermentation du glucose se traduit par une coloration franchement rouge, la réduction du milieu par une décoloration du milieu. Les bactéries donnant une coloration vertes sont non glucydolytiques et alcalinisantes.

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Rothe_(milieu_de)

Usage : enrichissement en Enterococcus (Microbiologie alimentaire)

Composition :

	peptone	20,0 g
	glucose	5,0 g
	azide	0,2 g
	NaCl	5,0 g
	hydrogénophosphate de potassium	2,7 g
	dihydrogénophosphate de potassium	2,7 g
	pH = 6,8	

Préparation :

36,2 g par litre (simple concentration) ou 72,4 (double concentration). Autoclavage classique

Lecture :

Ce milieu permet l'enrichissement en Entérocoques d'un inoculum de produit alimentaire.Un trouble signe la présence éventuelle de ces bactéries qu'il faudra ensuite confirmer par le test de Litsky, l'isolement et l'identification des colonies.

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Sabouraud_(Gélose)

Usage : isolement non sélectif des champignons

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Glucose massé	20,0 g
	Agar	15,0 g
	pH = 6,0	

Préparation :

45 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :


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Sabouraud_à_l'actidione_(Gélose)

Usage : isolement des champignons pathogènes (élimination des moisissures)

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Glucose massé	20,0 g
	Actidione (cycloheximide)	0,5 g
	Agar	15,0 g
	pH 6,0	

Préparation :

46 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :


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Sabouraud_à_la_gentamycine_(Gélose)

Usage : isolement des champignons dans un produit contenant des bactéries

Composition :

	Peptone pepsique de viande	10,0 g
	Glucose	20,0 g
	Gentamycine	0,04 g
	Agar	15,0 g
	pH = 6,0	

Préparation :

45,5 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :


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Sabouraud_au_Chloramphénicol_et_à_l'actidione

Usage : isolement sélectif des champignons pathogènes (produit contenant des bactéries et des moisisures)

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Glucose massé	20,0 g
	Chloramphénicol	0,5 g
	Actidione (Cycloheximide)	0,5 g
	Agar	15,0 g
	pH = 6,0	

Préparation :

46 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :


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Sabouraud_au_Chloramphénicol

Usage : isolement sélectif des champignons (produit contenant des bactéries)

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Glucose massé	20,0 g
	Chloramphénicol	0,5 g
	Agar	15,0 g
	pH = 6,0	

Préparation :

45,5 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :


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Sabouraud-Tétrazolium_au_chloramphénicol_(Gélose)

Usage : isolement et différenciation des Candida

Composition :

	Peptone	10,0 g
	Glucose massé	20,0 g
	2-3-5-triphényltétrazolium chlorhydrate	0,10 g
	Chloramphénicol	0,5 g
	Agar	20,0 g
	pH = 6,0	

Préparation :

46 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :

Les colonies réduisant le TTC apparaissent roses.

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Salmonella-Shigella_(Gélose_SS)

Usage : Isolement des Salmonella et des Shigella mais aussi des Pseudomonas ou des Yersinia enterocolitica.

Composition :

	peptone	5,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	lactose	10,0 g
	citrate de sodium	10,0 g
	citrate de fer III	1,0 g
	sels biliaires	8,5 g
	vert brillant	3,3 mg
	rouge neutre	25 mg
	thiosulfate de sodium	8,5 g
	agar	12,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

63 g de poudre dissous par ébullition. Se reporter à la notice en raison de variations de la composition.(formule moins inhibitrice des Shigella à 5,5 g de sels biliaires par exemple)NE PAS AUTOCLAVER

Lecture :

lac - : colonies incoloreslac + : colonies rougescentre noir : H2S +pas de centre noir : H2S -Ne cultivent normalement sur ce milieu que les Gram - cultivant facilement. Toutefois on peut rencontrer des Enterococcus tout particulièrement pour certaines compositions.Les coliformes, comme les bacilles oxydase + ne sont pas inhibés contrairement aux affirmations parfois rencontrées. Ils peuvent l'être partiellement mais

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Schaedler_(Bouillon_de)

Usage : culture des anaérobies

Composition :

	peptone trypticase-soja	10,0 g
	peptone	5,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	chlorhydrate de cystéine	0,4 g
	hémine	0,01 g
	glucose	5,0 g
	tampon TRIS	0,75 g
	pH = 7,6	

Préparation :

26,2 g par litrestérilisation à l'autoclave

Lecture :


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Schaedler_(Gélose_de)

Usage : isolement des anaérobies

Composition :

	peptone trypticase-soja	10,0 g
	peptone	5,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	chlorhydrate de cystéine	0,4 g
	hémine	0,01 g
	glucose	5,0 g
	tampon TRIS	0,75 g
	agar	13,5 g
	pH = 7,6	

Préparation :

26,2 g par litrestérilisation à l'autoclave

Lecture :


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Sélénite_(bouillon)

Usage : bouillon d'enrichissement en Salmonella

Composition :

	peptone	5,0 g
	lactose	4,0 g
	disélénite de sodium	10,0 g
	hydrogénophosphate de sodium	4,0 g
	pH = 7,0	

Préparation :

ATTENTION : le sélénite est un poison violent, tératogène et probablement cancérigène.19 g par litre de milieu de base et ajouter 4 g de disélénite de sodium par litre de milieu. NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :


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Sérum_de_Boeuf_coagulé_(SBC)

Usage : isolement de Corynebacterium diphteriae, étude de la gélatinase

Composition :

	sérum de boeuf	1000 ml

Préparation :

milieu prêt à l'emploi.

Lecture :

L'hydrolyse des protéines du sérum se traduit par un creusement de la gélose.Les bactéries hydrolysant ces protéines sont généralement gélatinase +.

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Slanetz_(gélose_de)

Usage : dénombrement des Entérocoques en microbiologie alimentaire

Composition :

	peptone	20,0 g
	glucose	2,0 g
	azide de sodium	0,4 g
	chlorure de triphényltétrazolium (TTC)	0,1 g
	hydrogénophosphate de sodium	4,0 g
	agar	10,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

36,5 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER

Lecture :

Les Enterococcus donnent des colonies moyennes roses ou rouges. Des Bacillus donnent des colonies de même aspect mais généralement plus grandes.

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TCBS

Usage : isolement des Vibrio cholerae

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	saccharose	20,0 g
	citrate de sodium	10,0 g
	citrate de fer III	1,0 g
	bile de boeuf	8,0 g
	bleu de bromothymol	40 mg
	bleu de thymol	40 mg
	thiosulfate de sodium	10,0 g
	chlorure de sodium	10,0 g
	agar	14,0 g
	pH = 8,6	

Préparation :

88 g par litre à dissoudre à ébullition.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Colonies jaunes : saccharose +Colonies bleues ou vertes : saccharose -.Centre noir : H2S +.Pas de centre noir : H2S -.Les Vibrio cholerae donnent des colonies jaunes sans centre noir.

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TGY_et_TY

Usage : milieu pour anaérobies (gélosé ou non). TGY est glucosé, TY peut être additionné du glucide voulu.

Composition :

	Trypticase	30,0 g
	extrait de levure	20,0 g
	chlorhydrate de cystéine	1,0 g
	Glucose	0 ou 5,0 g
	Agar	0 à 15 g
	pH = 7,2	

Préparation :

prêt à l'emploi.

Lecture :

Milieu à régénérer et à vaseliner avant incubation.Différents additifs peuvent être ajoutés.Pour la lecture de la fermentaiton des glucides, ajouter après culture, 5 gouttes d'une solution de BCP à 2/10000 ou mesurer au pH-mètre.Pour l'étude de l'hydrolyse de l'esculine ajouter après culture, 3 gouttes de citrate de fer III ammoniacal à 1%.Pour la recherche de l'indole, ajouter 1 ml de xylène (ou un solvant équivalent) afin d'extraire l'indole par une vigoureuse agitation. Ajouter après une minute de décantation, le réactif de Kovacs.

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Tinsdale_(Gélose)

Usage : isolement de Corynebacterium diphtheriae

Composition :

	peptone	20,0 g
	extrait de levure	5,0 g
	sérum de boeuf	100 ml
	L-cystine	0,24 g
	tellurite de potassium	0,35 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	thiosulfate de sodium	0,43 g
	agar	15,0 g
	pH = 8,0	

Préparation :

45 g par litre. NE PAS AUTOCLAVER.Sérum, tellurite et thiosulfate sont ajouter après ébullition.

Lecture :

Colonies noires : H2S + et réduction du tellurite en tellure (probablement)Corynebacterium présente cet aspect.

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Todd-Hewitt_(bouillon)

Usage : culture des Streptococcus

Composition :

	infusion de viande dégraissée	10,0 g
	tryptone	20,0 g
	glucose	2,0 g
	hydrogénocarbonate de sodium	2,0 g
	chlorure de sodium	2,0 g
	hydrogénophosphate de sodium	0,4 g
	pH = 7,8	

Préparation :

36,4 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Bouillon riche bien adapté à Streptococcus penumoniae.

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Trypticase-Soja_(gélose)

Usage : isolement standard

Composition :

	peptone trypsique de caséine	15,0 g
	peptone papaïnique de soja	5,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 7,3	

Préparation :

30 g par litre.Autoclavage classique.

Lecture :


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TSC_(Tryptone_Sulfite_Cyclosérine)

Usage : milieu de dénombrement des Clostridium perfringens ou des Clostridium sulfito-réducteurs.

Composition :

	tryptone	20,0 g
	citrate de fer III ammoniacal	1,0 g
	cyclosérine	0,4 g
	disulfite de sodium	1,0 g
	agar	5,0 g

Préparation :

27,4 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :

Les colonies noires cultivant en profondeur peuvent être des Clostridium sulfito réducteurs. Incubé à 46°C, il s'agit probablement de Clostridium perfingens.

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TSI

Usage : utilisation du lactose, fermentation du glucose, production d'H2S

Composition :

	peptone	15,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	peptone pepsique de viande	5,0 g
	glucose	1,0 g
	lactose	10,0 g
	saccharose	10,0 g
	rouge de phénol	0,024 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	sulfate de fer II (Pasteur)	0,2 g
	thiosulfate de sodium	0,3 g
	agar	11,0 g
	pH = 7,5	

Préparation :

63,5 g par litre.Stérilisation classique.

Lecture :

Pente jaune : lactose et/ou saccharose +, Pente rouge : lactoseet saccharose -Culot jaune : glucose + et aéro-anaérobie, Culot rouge : glucose - ou aérobie stricte.Présence d'un précipité noir : H2S +

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TSN_(Tryptone_Sulfite_Néomycine)

Usage : milieu de dénombrement des Clostridium perfringens ou des Clostridium sulfito-réducteurs.

Composition :

	tryptone	15,0 g
	extrait de levure	10,0 g
	citrate de fer III ammoniacal	0,5 g
	sulfate de néomycine	50 mg
	sulfate de polymyxine	20 mg
	sulfite de sodium	1,0 g
	agar	12,0 g
	pH = 7,2	

Préparation :

39 g par litre.Autoclavage classique.Conditionnement en boîte ou en tubes.

Lecture :

Les colonies noires culitvant en profondeur peuvent être des Clostridium sulfito-réducteurs. Incubé à 46°C, il s'agit probablement de Clostridium perfingens.

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Urée_de_Christensen

Usage : recherche de l'Uréase

Composition :

	peptone	1,0 g
	glucose	1,0 g
	urée	24,0 g
	rouge de phénol	0,012 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	2,0 g
	agar	17,5 g
	pH = 6,8	

Préparation :

Prêt à l'emploi.

Lecture :

Coloration rose- rouge : uréase +Coloration jaunâtre : uréase -

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Urée-tryptophane_(Urée_Indole)

Usage : recherche de l'indole, de l'uréase et de la TDA

Composition :

	urée	2,0 g
	L-tryptophane	0,3 g
	éthanol à 0,95	1 ml
	rouge de phénol	2,5 mg
	chlorure de sodium	0,5 g
	dihydrogénophosphate de potassium	0,1 g
	hydrogénophosphate de potassium	0,1 g
	pH = 7 ??	

Préparation :

à stériliser par filtration.(utiliser de l'eau stérile pour limiter la contamination initiale)

Lecture :

milieu rouge (basique) : uréase +milieu orange ou jaune : uréase -après addition de réactif de Kovacs : anneau rouge (indole +), anneau jaune (indole -)après addition de chlorure de fer III : marron (TDA +), jaune (TDA -)

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Vert_brillant_et_Rouge_de_Phénol_(Gélose)

Usage : Isolement des Salmonella en microbiologie alimentaire (Edel et Kampelmarcher)

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	5,0 g
	extrait de levure	3,0 g
	lactose	10,0 g
	saccharose	10,0 g
	vert brillant	4,7 mg
	rouge de phénol	90 mg
	hydrogénophosphate de sodium	1,0 g
	dihydrogénophosphate de potassium	0,6 g
	agar	12,0 g
	pH = 6,9	

Préparation :

25,8 g de poudre dissoute par ébullition. NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Colonies rouges : lac et sac -.Colonies jaunes : lac ou sac +.Salmonella Typhi ne cultive pas sur ce milieu.

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VF_(gélose)

Usage : détermination du type respiratoire des micro-organismes.

Composition :

	base viande foie	30,0 g
	glucose	2,0 g
	agar	6,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

38 g par litre. Autoclavage classique.Conditionnement en tube longs et fins.

Lecture :

L'absence de culture révèle des bactéries exigeantes comme les Haemophilus NAD dépendants.La hauteur de la culture permet de déterminer le type respiratoire :- culture sur toute la hauteur : aéro-anaérobie- culture seulement en haut : aérobie stricte- culture seulement 1 cm au dessous du haut : anaérobie stricte- culture limitée entre 0,5 et 1,5 cm du haut : micro-aérophile.

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VF_nitratée_(gélose)

Usage : détermination du type respiratoire des micro-organismes.

Composition :

	base viande foie	30,0 g
	glucose	2,0 g
	nitrate de sodium	10,0 g
	agar	6,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

38 g par litre de milieu VF + 10 g de nitrate de sodium. Autoclavage classique.Conditionnement en tube longs et fins.

Lecture :

Voir VF.La réduction des nitrates par une bactérie aérobie stricte se traduit par la culture sur toute la hauteur du tube et la production de diazote sous forme de bulles.

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Viande_Levure_(VL)

Usage : isolement des anaérobies strictes, recherche du type respiratoire

Composition :

	peptone	10,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	extrait de levure	6,0 g
	chlorhydrate de cystéine	0,3 g
	Glucose	2,0 g
	chlorure de sodium	5,0 g
	Agar	6,0 g
	pH = 7,4	

Préparation :

32,3 g de poudre par litre. Conditionnement en tubes fins (ou parfois en boîte)Autoclavage classique.Des additifs peuvent être ajoutés ensuite.

Lecture :

Régénérer le milieu avant utilisation.Voir VF pour la lecture.

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VRBG

Usage : Dénombrement des Entérobactéries

Composition :

	peptone	7,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	glucose	10,0 g
	désoxycholate de sodium	1,5 g
	cristal violet	2,0 mg
	rouge neutre	30,0 mg
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

38,5 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

Colonies incolores : bacilles Gram - et glucose -Colonies rouges: bacilles Gram - et glucose +. (probablement Entérobactéries)

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VRBL

Usage : Dénombrement des coliformes

Composition :

	peptone	7,0 g
	extrait de viande	3,0 g
	lactose	10,0 g
	désoxycholate de sodium	1,5 g
	cristal violet	2,0 mg
	rouge neutre	30,0 mg
	chlorure de sodium	5,0 g
	agar	15,0 g
	pH = 6,8	

Préparation :

38,5 g par litre.NE PAS AUTOCLAVER.

Lecture :

colonies incolores : lactose -colonies rouges : lactose +

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XLD_(Gélose)

Usage : Isolement de Salmonella et Shigella

Composition :

	extrait de levure	3,0 g
	chlorhydrate de L-Lysine	5,0 g
	lactose	7,5 g
	saccharose	7,5 g
	xylose	3,8 g
	citrate de fer III ammoniacal	0,8 g
	désoxycholate de sodium	1,0 g
	rouge de phénol	80 mg
	chlorure de sodium	5,0 g
	thiosulfate de sodium	6,8 g
	agar	12,5 g
	pH = 7,4	

Préparation :

53 g par litre à chauffer SANS EXCÈS jusqu'à ébullitionRefroidir rapidement à 50°C avant de couler.

Lecture :

colonies rouges : lactose, saccharose et xylose - et LDC - (Shigella, Providencia, Edwarsielle) ou lactose et saccharose -, xylose + et LDC + (en raison d'une alcalinisation par la LDC et une faible acidification par l'utilisation du xylose) (Salmonella)Centre noir : H2S +Pas de centre noir : H2S -

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Yersinia_CIN_(gélose_de_Schiemann)

Usage : Isolement de Yersinia enterocolitica

Composition :

	peptone	20,0 g
	extrait de levure	2,0 g
	mannitol	20,0 g
	pyruvate de sodium	2,0 g
	éthanol	2 ml
	désoxycholate de sodium	0,5 g
	cristal violet	1,0 mg
	cefsulodine	15,0 mg
	irgasan	4,0 mg
	novobiocine	2,5 mg
	rouge neutre	1,0 mg
	chlorure de sodium	1,0 g
	sulfate de magnésium	10 mg
	agar	12,5 g
	pH = 7,4	

Préparation :

29 g par litre. Autoclavage classique.Ajouter ensuite le supplément contenant les antibiotiques (CIN).Lecture :

L'incubation sera faite de préférence à 22-32°C pendant 24 à 48 heures.Colonies rouges : mannitol +.Colonies incolores : mannitol -.Les colonies de Yersinia enterocolitica sont rouges et petites (1 mm de diamètre environ) et entourées d'une zone translucide.

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