Test d'identification d'identification de Staphylococcus aureus.

Version 2. Date jeudi 27 octobre 2005

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

La thermonucléase est une enzyme spécifique que seules quelques espèce bactériennes possède. Ce test est donc un test d’identification de l’espèce pathogène Staphylococcus aureus.
C’est donc un test fondamental pour identifier S.aureus mais il faut compléter ce test d’indentification par d’autres tests : recherche de la protéine A, recherche de la coagulase libre, etc.
Recherche de la nucléase = DNase = nucléase
Recherche de la termonucléase = nucléase thermorésistante.

 

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

Composants Qté Rôles
ADN 0,3 g Substrat de la DNAse
Bleu de toluidine
à 0,1 mol. dm-3
3,0 ml  Indicateur coloré d’oxydoréduction
Tampon TRIS pH 950 mmol dm-3 ermet de maintenir l’ADN à l’état dénaturé.
Chlorure de calcium  10 mmol.dm-3 1,0 dm3 Calcium nécessaire à l’activité nucléasique de l’enzyme
Chlorure de sodium 10,0 g 1,0 mL Maintient de la force ionique.
Agar 0,0 g Milieu solide

Les pH final du milieu est de 9(voir tampon)

Il n’y a pas de source de carbone, d’azote et d’énergie.
C’est un « milieu » synthétique dont la composition est connu précisément.
Ce « milieu » ne permet pas la croissance des bactéries !!!

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

Il suffit de mettre en présence la bactérie le substrat de l’enzyme (ici l’ADN) ainsi qu’un indicateur coloré d’oxydoréduction. Si la bactérie possède la nucléase alors l’ADN est dépolymérisé en nucléotides qui font viré au rose le bleu de toluidine

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

-(1) Réaliser des puits réguliers
-(2) Réaliser un repérage des dépôts sur les tranches de la boîte de Pétri
-(3) Déposer la suspension bactérienne de façon suffisante (ne pas déborder!!!)
-(4)Dans le cas d’un test de recherche de thermonucléase, test le plus souvent réalisé, il faudra appliquer un traitement thermique à la suspension bactérienne.
-(5) Incuber 24h, 37°C, NE PAS RETOURNER LA BOITE
-(6) Lire

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

Caractère

Schématisation des résultats

Photos

Interprétation et résultats

 

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Test thermonucléase / gélose à l'ADN +bleu de toluidine

But

Composition

Principe

Utilisation

Lecture

Remarques

Sécurité :
-Attention au coupures si vous choisissez la technique de perforation avec la pipette Pasteur.
Technologie :
-Attention la réalisation de « beaux » puits est fondamentale.
Vous pouvez demander à vous exercer avant de maîtriser la technique. En effet, la réalisation de puits bien délimité de taille régulière vous aiderons pour les techniques d’immunologie en terminale.

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Les milieux d'identification

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