Les milieux d'identification

Lecture

Remarques

Ce milieu permet la lecture de trois caractères :

- l'utilisation du mannitol, (voir métabolisme glucidique)

- la mise en évidence de la mobilité,(voir structure bactérienne)

- la présence d'une enzyme respiratoire la nitrate réductase. (voir métabolisme énergétique)

La mise en évidence de ces trois caractères peut être un outil précieux pour discriminer les bactéries entre elles, donc un outil utile pour l'identification bactérienne.

Ex : Ce milieu est utilisé dans l'identification de la famille des Enterobacteriaceae.

Milieu "M.M.N."Mannitol - mobilité - nitrate.

Recherche de la fermentation du mannitol et de la nitrate réductase.

But

Lecture

Remarques

Peptone trypsique de viande	20 g	Source d'acides aminés, d'azote, de carbone et dans une moindre mesure d'énergie.
KNO3 ( nitrate de potassium)	2 g	Les nitrates joueront le rôle d'accepteur final d'électrons en d'autres termes ils joueront pour la bactérie le même rôle que l'oxygène que l'on respire. Il permettront de mettre en évidence la "respiration nitrate".*
Agar	4 g	La faible concentration en agar en fait un milieu semi-solide permettant de mettre en évidence la mobilité.
Mannitol	2 g	Source de carbone et d'énergie du milieu
Rouge de phénol à 1 %	4 mL	Indicateur coloré de pH permettant de mettre en évidence l'utilisation du mannitol
		Acide	Neutre	Alcalin
Le pH du milieu est d’environ 7,4 donc le milieu sera de couleur orange.

* vous verrez plus tard que la réduction des nitrates n'a pas pour seul but la respiration.

Milieu "M.M.N."Mannitol - mobilité - nitrate.

Recherche de la fermentation du mannitol et de la nitrate réductase.

But

Lecture

Remarques

-Utilisation du mannitol premier caractère à lire !!! mannitol premier caractère à lire !!! mannitol premier caractère à lire !!!

L'utilisation du mannitol se traduira par une acidification qui sera mise en évidence par le virage d'un indicateur coloré (ici le rouge de phénol)

	milieu jaune---> virage du RP ---> acidification du milieu--->utilisation du mannitol comme source de carbone et d'énergie--->Mannitol (+)
	milieu orange---> pas de virage du RP ---> ni acidification ni alcalinisation du milieu--->pas utilisation du mannitol comme source de carbone et d'énergie--->Mannitol (-). Dans ces conditions il faut vérifier que la bactérie a bien été ensemencée et vérifier son type respiratoire.
	milieu rouge---> virage du RP ---> alcalinisation du milieu---> la bactérie utilise les peptones comme source de carbone et d'énergie et non le mannitol--->Mannitol (-).

- Mise en évidence de la mobilité

L'utilisation d'un milieu faiblement concentré en agar (milieu semi-solide) favorise la mobilité des bactéries mobiles dans le milieu.

La technique d'ensemencement permet de cerner dans l'espace.

et en utilisant un mode d'ensemencement délimité dans l'espace

Les bacilles mobiles diffusent à partir de la piqûre d’ensemencement, ceci est possible grâce à la faible quantité d’agar ( que contient cette gélose.

-Recherche de la nitrate réductase. "NR"

Recherche d’une nitrate réductase. La recherche de la nitrate réductase s’opère comme sur le bouillon nitraté. Verser à la surface de la gélose quelques gouttes de réactif de Griess ( Nit I et Nit II ) etc...

On tire les mêmes conclusions qu’avec le bouillon nitraté.

Milieu "M.M.N."Mannitol - mobilité - nitrate.

Recherche de la fermentation du mannitol et de la nitrate réductase.

But

Lecture

Remarques

Les milieux doivent être coulés dans des tubes peu rayés.

Ensemencer au fil droit par piqûre centrale.

Incuber 24 H à 37°C.

Milieu "M.M.N."Mannitol - mobilité - nitrate.

Recherche de la fermentation du mannitol et de la nitrate réductase.

But

Lecture

Remarques

Caractères lus sur MMN (Mannitol-Mobilité-Nitrate) : deux caractères sont lus directement : l'utilisation du mannitol et la mobilité de la bactérie.

un caractère est lu indirectement après ajout des réactifs

Caractère

Schématisation des résultats

Photos

Interprétation et résultats

Fermentation du mannitol		- milieu jaune - Virage du rouge du phénol révèle l'acidité du milieu - la bactérie a fermenté le mannitol -Elle est dite mannitol +
		- milieu rouge - Virage du rouge du phénol révèle la basicité du milieu - la bactérie n'a pas fermenté le mannitol -Elle est dite mannitol (-)
Lecture de la mobilité		- le milieu est trouble - la bactérie s'est déplacée pour coloniser tout le milieu - la bactérie est donc mobile -Elle est dite mobile ou mobilité (+)
		- il y a des colonies seulement le long de a piqûre centrale. - la bactérie ne s'est pas déplacées pour coloniser le milieu - la bactérie est donc immobile -Elle est dite immobile ou mobilité (-)
Lecture de la réduction des nitrates en nitrite par la nitrate réductase	cliquer ici pour lire la fiche concernant le bouillon nitraté où sont repris les lectures
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Milieu "M.M.N."Mannitol - mobilité - nitrate.

Recherche de la fermentation du mannitol et de la nitrate réductase.

But