milieu urée tryptophane

- KH2PO4	0,1 g	léger effet tampon
- K2HPO4	0,1 g	léger effet tampon
- NaCl	0,5g	milieu hypotonique favorisant l'éclatement des cellules et la libération des enzymes
- Alcool à 95°	1 mL	facilite la libération des enzymes
Recherche de la tryptophanase et de la tryptophane désaminase
- L-tryptophane	0,3 g	substrat de deux enzymes recherchées la TDA et la tryptophanase
Système de lecture de l’uréase
- Urée [ CO(NH2)2 ]	2 g	substrat d'une enzyme l'uréase
- Rouge de phénol à 1%	0,25 mL	Indicateur coloré de pH
- Eau distillée	100 mL

Ce milieu d’identification permettra de rechercher un certain nombre d’enzymes présentes ou non chez les bactéries à identifier.

Mise en évidence d’une uréase.

Les bactéries qui possèdent une uréase active réaliseront la réaction suivante

urtrp006.jpg (3672 octets)

Le CO2 et le NH3 se combinent ensuite pour donner du carbonate d’ammonium selon la réaction :

urtrp005.jpg (3276 octets)

Sous l’action d’une uréase il y a donc alcalinisation du milieu.

Recherche de la tryptophane désaminase :TDA

Sous l’action de cette enzyme le tryptophane est dégradé selon la réaction :

urtrp004.jpg (5913 octets)

L’addition de chlorure de fer III (perchlorure de fer) réagit avec l’acide indol-pyruvique en donnant un précipité de couleur marron.

Recherche de la tryptophanase = en évidence de la production d’indole.

Certaines bactéries dégradent le tryptophane en indole grâce à une tryptophanase selon la réaction :

urtrp003.jpg (5669 octets)

L’addition de réactif de Kovacs se traduit par l’apparition d’un anneau rouge, dû à la réaction entre le noyau indole et une des substances du réactif.

Elle se fait en plusieurs temps :

L'uréase se fait directement soit pendant l'incubation soit au bout de 24 h.

La recherche des deux autres enzymes (tryptophane désaminase et tryptophanase) se fait au bout de 24 h en séparant le contenu du milieu en deux tubes.

Caractère

Schématisation des résultats

Photos

Interprétation et résultats

Recherche de l'uréase			- le milieu est rouge - le rouge de phénol a viré, le milieu est donc basique - la bactérie a dégradé l'urée en CO3(NH4) - la bactérie possède donc l'uréase - elle est dite Uréase (+) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)
			- le milieu n'a pas changé de couleur - le rouge de phénol n'a pas viré, - la bactérie n'a pas dégradé l'urée en CO3(NH4) - la bactérie ne possède donc pas l'uréase - elle est dite Uréase (-) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)
Recherche de la tryptophane désaminase = TDA			-il y a un précipité marron - le perchlorure de Fer a réagit avec l'acide indol-pyruvique - la bactérie a dégradé la tryptophane avec la tryptophane désaminase - la bactérie est dite tryptophane désaminase (+) = TDA (+) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)
			- il n'y a pas un précipité marron - le perchlorure de Fer n'a pas réagit avec l'acide indol-pyruvique - la bactérie n'a pas dégradé la tryptophane avec la tryptophane désaminase - la bactérie est dite tryptophane désaminase (-) = TDA (-) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)
Recherche de la tryptophanase			- il se forme un anneau rouge à la surface du milieu - le réactif de kovacs a réagit avec l'indole - la bactérie a dégradé la tryptophane avec la tryptophanase - elle est dite tryptophanase (+) ou indole (+) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)
			- il ne s'est pas formé un anneau rouge à la surface du milieu, le réactif de kovacs n'a pas réagit avec l'indole - la bactérie n'a pas produit d'indole - la bactérie n'a pas dégradé la tryptophane avec la tryptophanase - elle est dite tryptophanase (-) ou indole (-) Voir les résultats sur micro-galerie AI 20E(R)

Milieu urée - tryptophane "anciennement appelé urée - indole"
But	Composition	Principe	Utilisation	Lecture	Remarques

Milieu urée - tryptophane "anciennement appelé urée - indole"
But	Composition	Principe	Utilisation	Lecture	Remarques

Milieu urée - tryptophane "anciennement appelé urée - indole"
But	Composition	Principe	Utilisation	Lecture	Remarques

Milieu urée - tryptophane "anciennement appelé urée - indole"
But	Composition	Principe	Utilisation	Lecture	Remarques

Recherche de l'uréase

Recherche de la tryptophane désaminase

= TDA

Recherche de la tryptophanase